各位做实验的时候都遇到过这种情况吗？

当您开开心心地把养好的细胞拿出来

准备做后续实验时

突然发现

“啊~~~，我的细胞又长跑偏了！！！”

谁能体会实验猿的这种心塞
 

 

那么这个时候我们就发挥出了作为一个实验猿的耐心和决心

一定要搞清楚，到底是哪一步出现了问题

导致细胞形态异常

BI 中国市场部为大家贴心的准备了一份礼物~

鱼骨图

接下来，大家跟紧小编的步伐，一起去探索鱼骨图的奥秘吧 ！
 

鱼骨图是一种分析问题产生的质量管理方法，此鱼骨图分析造成细胞形态发生异常时的几个主要原因：

◆ 外源污染（微生物污染）

◆ 内源异常（细胞层面）

◆ 人为操作/环境

◆ 培养基

◆ 辅助试剂

◆ 培养耗材
 

鱼骨图可帮助研究人员厘清实验上的问题。鱼骨图鱼刺的大到小或近到远,相应表示问题发生概率的高低。
 

接下来，我们将逐条分析这些污染原因，并为大家附上解决方案。
 

外源污染主要指的是微生物污染，又可分为以下几点：

 

以下几种微生物污染，通常是肉眼可见突发式造成细胞培养基浑浊和变色，在可见光显微镜下可以观察到真菌、酵母菌和细菌污染状况。

 

1  真菌，酵母菌
 

真菌：这类微生物外观类似棉絮状的漂浮物，在显微镜下可观察到菌丝体，污染早期不会使培养基变黄。
 

酵母菌：显微镜下常见成串的珠状物形态呈卵形，大约比细胞小 5~10 倍，当其进行出芽生殖时，会聚集成连体结构；爆发污染严重时，会造成培养基 pH 值改变，不易除去。
 

解决方案：

表 1.产品列表

产品名称-中文名称	货号	作用种类
两性霉素B，250 mg/ml	03-028-1	真菌，酵母菌和霉菌
两性霉素B，2500 mg/ml	03-029-1
制真霉素，10000 units/ml	03-030-1	真菌，酵母菌和霉菌
青链双抗（青霉素-链霉素）	03-031-1	对革兰氏阳性菌G+，革兰氏阴毒性G-
青链双抗（青霉素-链霉素）10X 浓缩	03-031-5
青链霉素，制真菌素三抗	03-032-1	真菌、酵母菌和霉菌、G+、G-
青链霉素，两性霉素B三抗	03-033-1	真菌、酵母菌和霉菌、G+、G-
青链霉素，新霉素三抗	03-034-1	真菌、酵母菌和霉菌、G+、G-
硫酸庆大霉素溶液，50 mg/ml	03-035-1	对革兰氏阳性菌，革兰氏阴性菌，支原体
卡那霉素溶液，10 mg/ml	03-049-1	对革兰氏阳性菌，革兰氏阴性菌，支原体

 

2  细菌
 

细菌污染时，培养基在短时间内变成黄色或白色浑浊，细胞停止生长甚至死亡；有些状况下培养基颜色改变不明显但细胞形态会变异（出现多角，多核状况）、细胞不附着，显微镜观察背景有大量黑点。
 

解决方案：（同上表格 1）
 

Dr.Cell 可提供：微生物测序检测
 

3  支原体
 

支原体种类较多，常以寄生或腐生营养方式生长，广泛存在于环境之中，是细胞培养过程常见污染，经常来源于实验人员（支原体常见于人体皮肤、呼吸道、生殖道和消化道）、动物源血清及胰酶、消毒不完全的器具，大小只有 0.15~0.3 μm，所以能通过一般标准的细胞培养过滤方法，0.22 μm 过滤膜。支原体增长速度相较于细菌比较缓慢，污染初期（轻微）培养基可能依然清澈不会变黄，所以轻微污染时不容易用常规方法发现（细胞外观观察或是 DNA 染色法）确认。
 

支原体污染不但会缓慢改变细胞形态、增殖、基因表达、蛋白合成及代谢反应，它携带的 DNA/RNA 与蛋白更可能造成 QPCR、Western Blot 或外泌体实验结果偏差。
 

解决方案：
 

Biological Industies（BI）可提供：支原体检测/处理/预防全套解决方案
 

表 2.支原体相关产品列表

Dr.Cell 可提供：支原体污染检测

 

4  黑胶虫 
 
目前科学界对黑胶虫并无定论，认为是不明沉淀现象或多种未知生物污染现象的通称。 

在高倍率显微镜头下，可观察到各式形状的小黑点（卵圆状、球状、杆状等）、活跃的布朗运动及明显游动现象，部分黑胶虫具有细胞毒性，可引起细胞生长迟缓或裂解凋亡。
 

解决方案：
 

Dr.Cell 可提供：黑胶虫样本鉴定
 

目前检测的黑胶虫样本，实际上 62% 为细菌，38% 为支原体（如下图 1）
 

5  病毒
 

病毒感染可能来自宿主动物细胞或病人，病毒感染及传播具有细胞专一性，在细胞培养污染物中是相对最难检测的。然而一旦细胞遭受污染后显微镜下能明显观察到细胞碎片增多、肿大、圆缩、脱落等病态变形，严重时会在单层细胞上观察到局部破损空斑。
 

解决方案：
 

可选用辐照血清以避免带进任何活的微生物进入培养体系。
 

                                 

        图 2.Before infection           图 3.After 24 hours infectiond
 

6  细胞交叉污染
 

细胞株的交叉污染，曾有文献报道统计，目前使用的细胞株大约有 15~20% 不是科学家们所认为的细胞，而在生物医药领域中，细胞来源和细胞株身份鉴定检测观念普遍缺乏。细胞株的交叉污染，常在不经意的实验疏失疏忽（不同细胞株分盘时，共享一瓶培养基、枪头、移液管忘记更换，而造成不同细胞株之间的混合污染，或是实验操作人员录入错误细胞株名称，继代时的培养皿，冷冻细胞时的冻存管）中发生，而造成错误后续数据搜集；目前大部分的科学期刊都已有“细胞相关实验论文发表前，均需附上细胞鉴定报告”的规定（可查阅：文章发表前要求提供细胞鉴定的杂志），以此保证数据来源的正确性。
 

目前常用的细胞身份验证的方式包括：短串联重复序列（STR）、同功酶分析、染色体组分型、扩增片段长度多态性（AFLP）的特征分析等方法。其中 STR，是目前国际细胞库（包括：ATCC、DSMZ或是 JCRB）常用于细胞株身份鉴定方法。
 

小编温馨提示，至少每半年一次进行细胞鉴定，当然理想情况每 2-3 个月鉴定一次，且课题开展前最好先确认使用的细胞身份。
 

解决方案：
 

Dr.Cell 可提供：

1. 人源细胞系 STR 鉴定（STR Authentication）

2. 细胞物种鉴定（Species Identification）-15 种常见模式动物的鉴定

 

THE END

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