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细胞有了支原体“小三”怎么办?
人阅读 发布时间:2019-08-06 11:46
那“小三”,名叫 支 · 原 · 体 !!!
因为这“小三”,我的细胞表现都变了!
瞒我这么久,原来这些日子都是假的!
就让BI带您来了解这位不速之客吧!
但!全球目前有在做常规支原体监控的细胞实验室却不到50%!
▲ 图1:支原体结构图
▲图2:支原体的各种形态
至今,共有超过180种支原体被发现,有超过20种能感染体外培养的细胞,而目前实验室最常见(95% 以上)的支原体则来自其中6种:
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源自于实验人员鼻腔、口腔,并经由飞沫传至培养细胞中的口腔支原体(M.orale)、猪鼻支原体(M.fermentans)及人型支原体(M.hominis),居于首位(占总体的50%以上)。
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其次则为大多来自牛血清的精氨酸支原体(M. Arginini)、莱氏无胆甾支原体(A. Laidlawii)、及来自猪源胰酶的猪鼻支原体(M. Hyorhinis)。
PS:BI胰酶经过辐照,不含活的支原体。
可恶的东西支原体“麻烦精”既然支原体是细菌的一种,抗生素一加不就好了吗?
为什么可以搞到全球这么多细胞库污染?
- 支原体体积非常小, 极易通过0.22um滤膜, 且一般光学显微镜无法观察到。
- 支原体能附着并存活在器物表面(操作台, 培养箱,显微镜等), 提高操作污染概率。
- 支原体生长缓慢,通常不破坏宿主细胞但默默改变了细胞生长代谢,且对传统抗生素具抗性,因为抗生素大多破坏细菌细胞壁, 而支原体恰恰没有细胞壁。
- 支原体污染初期, 培养基不变色, 细胞形态正常,但等大量污染时, 为时已晚, 耗时又耗力。
你说,支原体烦不烦!
怎知有“小三”?检测检测再检测目前检测方法可大致分成四种:
■微生物培养法
将样品培养在特殊琼脂培养基上,在37ºC有氧环境中孵育2周,阳性培养基上会长出100~400um大小的“煎蛋状”菌落。
■DNA萤光染色法
支原体DNA中A-T含量占多数(55~80%),容易被Hoechst 33258此荧光剂染上,被支原体污染之细胞经染色后,在细胞核外与细胞周围可看到许多大小均一之萤光小点。
■ELISA法
将支原体16S核糖体RNA标上标签,然后用特定抗体预包被过的微孔板对标签进行捕获,再加入显色用的抗体及底物,最后通过比色法得出检测结果。
■PCR法
原理为扩增支原体16S核糖体RNA的基因,能检测多达19种支原体,操作快速、准确性高,市面上有多款相关产品可参考 (BI:EZ-PCR支原体检测试剂盒)。
看我妙招 怎么消灭“小三”消灭支原体依不同处理发法,分成四大类:
■物理法:高温高压灭菌
■免疫法:使用支原体特异性抗血清、裸鼠传代法
■化学法:界面活性剂处理(BI:Pharmacidal 支原体喷壶)
■生化法:使用抗生素等药物(BI:BIOMYC 支原体处理试剂)目前,大环内酯(Macrolides)、四环素(Tetracyclines)和喹诺酮(Quinolones)这三类抗生素,是公认对抗支原体效果最佳的药物,而市面上有许多针对不同菌株配置的抗生素产品可以参考。
如果你的细胞检测结果为~"无支原体污染"那恭喜你啦!要好好维持!
要怎么预防支原体污染?培养良好的无菌操作实验习惯
感冒咳嗽时尽量不要使用细胞房,如果必须使用,请在实验后彻底清洁消毒使用空间。新购产品检测
新购买血清等动物源产品、细胞株等,在使用前先做支原体检测;或从有资质的正规厂商购买相关产品。(上海逍鹏生物-以色列BI细胞培养试剂)常规工作要落实
定期检测使用中的细胞,定期擦拭、清洁实验室环境(BI:Pharmacidal 支原体喷壶)。最小化抗生素使用频率
参考资料
非珍贵细胞污染,请直接丢弃,避免抗生素滥用导致抗药性产生
详情请点击:原文链接
Sugandha,G. Mycoplasma: Morphology, Cell Shape and Reproduction.Nikfarjam Laleh, Farzaneh Parvaneh. Preventionand Detection of Mycoplasma Contamination in Cell Culture. Cell J. 2012.