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分析完内源和外源污染状况

还是没有找到原因？

那么我们继续分析

根据鱼骨图鱼刺大小所代表的问题发生概率大小，接下来我们来谈谈实验操作过程中，有哪些因素会影响到我们的实验结果呢。
 

操作过程

操作过程又可细分为以下几类：

接下来我们将逐条进行分析↘

操作人员

人体皮肤表面平均带有10³~10⁶/cm²的微生物，污染物可能由于操作人员及穿着衣物带入。进出细胞房需穿着合适的实验衣及更换专用的拖鞋，尽量降低粉尘、皮屑及附带之微生物的扬起及掉落，以免造成污染。

解决方案：

人体是细菌最大的携带者，进出细胞房应该这么做：

1.换专用实验衣：勤更衣，无菌无尘衣穿过六小时后，已可在每平方公分中采集到1-6个微生物。

2.戴口罩：减少讲话，因为口水中含10⁷个微生物/ml，并且寄居在人体部分的支原体也会随之影响实验环境，所以应戴口罩操作。

3.戴手套：进入细胞房之前，应去除身上配戴所有与实验无关的随身物品，洗手，消毒，戴上手套，再使用75%酒精消毒。

细胞房出入口

无净化的室内空气可检测到浮游菌500~2000颗/cm³。

2015药典指导原则《9205药品洁净实验室微生物监测和控制指导原则》中，有规定不同洁净等级实验室的浮游菌和沉降菌数量要求。

解决方案：

1.按要求细胞房应为封闭、正压、洁净房间（1-10万级洁净度）。如受限于现况，可考虑医疗用移动式空气净化机，以净化空气。

2.如担心污染物外泄，细胞房还应设计为相对负压。

3.人员进出细胞房应有管制，经过培训才能进入操作，避免污染别人。

4.细胞房窗户不建议打开！打开窗户，许多细菌会乘机夹杂在空气中进入细胞房里。

★细胞房内绝对不可穿拖鞋或凉鞋，以避免带入脚气霉菌。应该穿全包裹式鞋套或专用鞋子

 

生物安全柜

生物安全柜需尽量保持清洁及净空，非必要性的物品不要放在里面，容易扰乱操作柜内气流。使用前一定要使用消毒杀菌溶液进行擦拭[如75%酒精或Pharmacidal（不需擦拭，自然风干）]，实验过程中，若出现液体飞溅的情况，应当马上用消毒剂擦拭；使用后需要进行消毒并且UV处理20分钟以上。生物安全柜与超净工作台的高效滤网（HEPA filter）滋生细菌后反而容易成为污染源，良好的操作环境，才能确保细胞的健康。

解决方案：

1.Biological Industries （BI）可提供：

产品名称	货号
支原体、细菌、真菌污染预防喷雾剂Pharmacidal	IC-110100

2.定期更换生物安全柜与超净工作台HEPA滤网，检测风速与测漏。

3.开始实验前，必须对超净台进行全面消毒,整个机柜表面进行擦拭，使用前先打开安全柜通风系统，流通空气，直到原有的内部浊气都被排出。

4.实验过程使用明火容易导致生物安全柜气流紊乱，非必要时应该尽量避免。
 

显微镜置物台

显微镜频繁地与不同细胞系接触，使显微镜也成了污染的高发地；使用显微镜观察细胞时，放置细胞培养皿或是培养瓶的载物平台与桌面，使用前后需要进行消毒，并保持干净，以免造成交叉污染。

解决方案：

Biological Industries （BI）可提供：

产品名称	货号
支原体、细菌、真菌污染预防喷雾剂Pharmacidal	IC-110100

 

二氧化碳培养箱

培养箱内的CO2、湿度和温度都需要定期校准，避免对细胞提供过低或过高的二氧化碳浓度和不当的湿度与温度；培养箱的环境非常适合微生物生长，所以水盘使用的水需灭菌并加入抑菌剂，且定期清洁擦拭培养箱体腔与不锈钢架，杜绝微生物滋生。

解决方案： 

1.Biological Industries （BI）可提供：

产品名称	货号
支原体、细菌、真菌污染预防喷雾剂Pharmacidal	IC-110100
支原体预防试剂Aquaguard-1	01-867-1B

2.选购可灭菌的二氧化碳培养箱，定期灭菌消毒。
3.避免将培养箱直接置于地面上，需要使用支架或置于实验桌上。如果培养箱直接放在地面上，每次打开门时产生的空气流动，会增加污垢、灰尘和污染物进入培养箱的机率。

4.培养箱的开门时间能短则短，开门次数越少越好，减少空气传播的污染物流入。

5.应避免在培养箱中有震动或是周围有离心设备，尤其细胞刚传代或是复苏时，如受到震荡摇晃会造成贴壁迟缓，甚至会有聚集成团的状况。
 

水浴锅

水浴锅常年潮湿，是细胞房中较容易滋生细菌及真菌的设备，需要定时清洁；污染源容易在细胞复苏、培养基或无菌试剂回温的过程中，粘附瓶身水滴并带入超净工作台中。

解决方案：

1.定期消毒更换水，水浴锅中应使用无菌超纯水，并加入抑菌剂。

Biological Industries （BI）可提供：

产品名称	货号
支原体预防试剂Aquaguard-2	01-916-1E

2.水浴回温时，必须确保容器的瓶盖不与水接触；因为污染源可能会在此时通过瓶盖的缝隙顺势留在瓶口。
3.水浴回温后必须确保容器表面擦干，75%酒精消毒后再放进生物安全柜。

4.水浴锅使用结束后，要记得将水浴锅盖子盖上，避免空气灰尘落入。
 

灭菌锅

灭菌锅及相关设备，都需要定时保养与校准以维持其正常性能，避免灭菌效果不达标。

解决方案：

定期做BD（Bowie Dick）测试，确保压力、温度与时间均符合灭菌要求。
 

离心机

离心机是细胞实验最常使用仪器, 离心机内部的小缝隙也是藏污纳垢之处，容易发生交叉污染的重灾区，会发生污染的重点怀疑对象。

解决方案：

定期清洁离心机内部的转子和腔室。

Biological Industries （BI）可提供：

产品名称	货号
支原体、细菌、真菌污染预防喷雾剂Pharmacidal	IC-110100

BI 中国市场部

好啦，本期介绍也就到这里啦，还没看过瘾的小伙伴记得每周关注公众号动态噢~
 

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