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小课堂FAQ| FBS基础问答

人阅读 发布时间:2019-12-30 09:42

欢迎大家来到---细胞培养知识小课堂

今天我们要讲的是细胞培养“主角”---血清
 

血清是一种纯天然培养基,含有细胞生长繁殖所需的多种营养成分,如蛋白质、多肽等,多用于细胞培养、生物制品及诊断试剂的生产。血清的主要成分是蛋白质,如:白蛋白,球蛋白,纤维粘连素(促进细胞附着)、α2巨球蛋白(抑制胰蛋白酶的作用),激素,胰岛素(可促进细胞摄取葡萄糖和氨基酸,促细胞分裂),类胰岛素生长因子(能与细胞表达的胰岛素受体结合,从而产生与胰岛素相同的作用),促生长激素(细胞增殖),胎球蛋白(促细胞附着),转铁蛋白(能结合铁离子,减少其毒性)。血清的组成成分与含量常常与供血动物性别、年龄、生理条件和营养条件有关。那么如何挑选合适的血清?使用血清时,需要注意哪些问题?请大家跟随我们进入逍鹏知识小课堂进行学习吧~
 
第三课
一、胎牛血清和新生牛血清的区别是什么?

取血年龄不同:牛血清按照牛取血时间或牛龄可进行区分。胎牛血清(Foetal Bovine Serum,简称FBS)指的是取自未出生,母牛剖腹得来的胎牛。

国产胎牛血清(并无明确定义,但通常以此称)的指的是出生4-6小时,且未进行哺乳(unsuckled)进食的牛,有时还称作国产新生牛。 

新生牛血清(Newborn Calf Serum,简称NBCS)指的是出生14天-3个月进行取血的牛。

成年牛血清(Adult Bovine Serum,简称ABS)指的是取血时牛龄通常超过12个月的牛。

以上取血牛龄的差异主要是受当地国家畜牧业的发展及法规限制影响,因为牛血多为畜牧业副产业,并未有专门为取血而养的牛。

组分与比例不同:这几种不同牛龄血清所含的促细胞生长因子、促贴附因子、激素及其他活性物质等组分与比例不同。常规来说,年龄越小的牛血清,细胞培养效果越好。胎牛血清培养效果好于新生牛,且因为胎牛未进食过母乳,所以IgG含量低。

用途与用法不同:根据细胞所需生长条件可确定。
 

二、如何挑选适合细胞生长的血清?

原代或是正常细胞株建议使用BI特级胎牛血清,对生长条件要求高的细胞和干细胞可选用专用特级胎牛血清,或胚胎干细胞专用金牌胎牛血清。

由于血清有批间差异,细胞种类不同,我们建议客户购买前可先申请试用样品,通过筛选得到满意的血清批号,之后根据项目需求可进行批量囤货,以保证该项目所需血清质量的一致性,可排除不同批号血清对于实验带来的影响。

三、如何正确保存血清?

需要长期保存的血清必须储存于-20℃冰箱(未开封血清有效期为5年)。若存放于4℃,请勿超过1个月,若一次无法用完一瓶,建议将血清无菌分装并冷冻。
四、如何解冻血清?
血清解冻需采用逐步解冻法:将血清从-20℃冰箱放入4℃冰箱中溶解一天,然后移入室温,待全部溶解后再分装。在溶解过程中需不断轻轻摇晃均匀(小心勿造成气泡),减少沉淀生成。切勿直接将血清从-20℃转入37℃解冻,这样因温差较大易造成蛋白质凝结并出现沉淀。
五、需要对新买的血清进行过滤吗?
血清在ISO13485认证的厂房中生产,经过30.1μm过滤,出厂经过检测并且会使用三种以上的细胞株进行培养测试及无菌检测,污染几率非常低。通常细胞污染有非常多的可能性,根据协助使用者进行分析检测,结果表明绝大部分都是因人为操作失误导致污染。因此买来的血清不需要再次进行过滤。
 
六、除了对血清进行检测,有何更直观的方式分辨血清质量?

目测法,我们可根据血清的颜色,沉淀,澄清度等进行区分。

颜色:颜色根据血清蛋白含量的不同,可表现出黄色或者红色。进口血清质量最好的呈现出淡黄、微红色,较差质量呈现出橘红色或鲜红色。热灭活血清或保存不当的,由于血红蛋白的破坏氧化,会呈现出暗红色,甚至咖啡色。

沉淀:血清中的沉淀主要是有纤维蛋白的凝聚产生。沉淀产生的原因很多,使用时反复冻融会增加沉淀。进口血清过滤分装前很少反复冻融,因此成品清澈。

澄清度:进口血清是由于蛋白和脂类等物质含量低,表现为稀薄、清淡。国产血清绝大多数为新生牛血清,相对而言更加粘稠,颜色略深。

七、为何血清会存在批间差?如何避免此影响?

因为血清来源于动物,其组成成分有1000种左右,每个批号的组分和组分含量都是不固定的,因此批间差异是可能存在的。

为了避免批间差异对细胞的影响,XP建议先进行批号测试,筛选合适的批号,备好库存(血清未开封时,在-20℃下可保存5年)。如需更换血清批次或产地,建议先试用后再大量订购。

八、血清中沉淀是什么成分?造成原因有哪些?如何预防和处理沉淀?

血清中沉淀主要有:纤维蛋白(絮状沉淀),甲胎蛋白,脂蛋白,冷凝集素,玻粘连蛋白,磷酸钙[1](显微镜下小黑点沉淀),胆固醇等。

原因:造成沉淀的主要原因是温度的改变。热灭活,反复冻融,长期储存于2-8℃或者室温。

预防措施与建议:因此不立即使用的血清应保存在-20℃或以下。

九、血清为何要热灭活,有必要对所有血清都灭活吗?如何正确的进行灭活?

加热可以灭活补体系统。启动的补体系统参与溶解细胞事件,刺激平滑肌收缩,细胞和血小板释放组胺,启动淋巴细胞和巨噬细胞活化。在免疫学研究中,培养ES细胞、昆虫细胞和平滑肌细胞时,推荐使用热灭活血清。

实验显示,热灭活血清对大多数的细胞而言是不需要的,对于非必须的细胞来说血清灭活对于细胞生长只有微小甚至无任何作用,还可能造成生长速率降低,沉淀物还会显著增多,不利于细胞观察。因此,若非必须,不需要对血清进行灭活处理。

将需要进行处理的血清置于56℃水浴30min,建议加放空白对照(同体积水)使用温度计测温,以测得温度为56℃时为计时起始点,加热中可不时轻度旋转混匀血清。

好啦

本期介绍到此结束

希望能帮到大家噢~

  Reference   

[1] Didier Raoult, Patricia Renesto et al. PLoS Pathogens. 2008 Feb., 4(2): e41

重要通知
本实验室将于2020年1月10日正式暂停技术检测服务,请年前需进行以上检测服务的亲们尽早安排送样,感谢大家支持与配合,不便之处请谅解。


 


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