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识破各种污染,拯救您的细胞
人阅读 发布时间:2020-10-30 16:55
当您的课题进行到白热化程度时
却发现细胞被污染了
此时大家的心情可谓五味杂陈
形容一下就是
问君能有几多愁,眼泪恰似一江春水向东流
不过,别担心
逍鹏生物炼就火眼金睛
帮助大家识破各种污染,拯救您的细胞
我们先来看看污染的真面目,总结下来无非以下几种类型:
我们一起来分析它们的特征:
1. 真菌-深藏不露
真菌之所以深藏不露,是因为它们一般不会导致培养基变浑浊,所以在污染早期,很难发现它们的踪迹。直到长到一定规模后在镜下可观察到分叉细丝状的菌丝(有些呈管状,树枝状,串珠状的菌丝)(如图 1,图 2)。这类污染中,为首的污染代表是酵母菌:显微镜下常见成串的珠状物,形态呈卵形,大约比细胞小 5~10 倍,当其进行出芽生殖时,会聚集成连体结构;爆发污染严重时,会造成培养基 pH 值改变,不易除去。
图 1. 真菌污染 图 2. 真菌污染
逍鹏生物可提供以下解决方案:
表1.产品列表
产品名称-中文名称 |
货号 |
作用种类 |
两性霉素 B,250mg/ml |
03-028-1B |
真菌,酵母菌和霉菌 |
两性霉素 B,2500mg/ml |
03-029-1B |
|
制真霉素,10000units/ml |
03-030-1C |
真菌,酵母菌和霉菌 |
青链双抗(青霉素-链霉素) |
03-031-1B |
对革兰氏阳性菌G+,革兰氏阴毒性G- |
青链双抗(青霉素-链霉素)10X 浓缩 |
03-031-5B |
|
青链霉素,制真菌素三抗 |
03-032-1B |
真菌、酵母菌和霉菌、G+、G- |
青链霉素,两性霉素 B 三抗 |
03-033-1B |
真菌、酵母菌和霉菌、G+、G- |
青链霉素,新霉素三抗 |
03-034-1B |
真菌、酵母菌和霉菌、G+、G- |
硫酸庆大霉素溶液,50mg/ml |
03-035-1B |
对革兰氏阳性菌,革兰氏阴性菌,支原体 |
卡那霉素溶液,10mg/ml |
03-049-1B |
对革兰氏阳性菌,革兰氏阴性菌,支原体 |
2. 细菌-屡见不鲜
细菌种类繁多,分布广泛,是最容易污染细胞的微生物。
图 3. 细菌污染
逍鹏生物可提供以下解决方案如上表 1:
3. 支原体-无孔不入
支原体是细胞培养过程中的常见污染,经常来源于实验人员(支原体常见于人体皮肤、呼吸道、生殖道和消化道)、动物源血清及胰酶、消毒不完全的器具。其大小只有 0.15~0.3μm,所以能通过一般标准的细胞培养过滤方法,0.22μm 过滤膜。其污染特征不是很明显,增长速度相较于细菌比较缓慢,污染初期(轻微)培养基可能依然清澈不会变黄,所以轻微污染时不容易用常规方法(细胞外观观察或是 DNA 染色法)确认。
支原体会缓慢改变细胞形态、增殖、基因表达、蛋白合成及代谢反应,它携带的 DNA/RNA 与蛋白更可能造成 QPCR、Western Blot 或外泌体实验结果偏差。
如下图所示:
图 4. 支原体污染
逍鹏生物可提供:支原体检测/处理/预防全套解决方案。
01. 即用型细胞培养中支原体检测 PCR 试剂盒
检测结果如图:
02. 支原体处理试剂
支原体检测/处理/预防全套解决方案
表 3. 产品列表
中文名称 |
货号 |
备注 |
支原体污染检测试剂盒 |
20-700-20 |
|
支原体污染处理试剂 |
03-036-1B/C |
|
03-037-1B/C |
||
03-038-1B/C |
||
支原体、细菌、真菌污染预防喷雾剂 |
IC-110100 |
|
支原体预防试剂 |
01-867-1B |
100ml,有效消毒二氧化碳培养箱中的水盘 |
01-916-1E |
50ml,有效消毒任何形式的水浴环境 |
4. 黑胶虫-神秘莫测
逍鹏生物可提供以下解决方案:
使用三抗(货号:03-032-1B)结合支原体处理试剂(货号:03-036 和 03-037 或 03-038)有效清除实验室黑胶虫污染。
5. 病毒-专一任性
图 5. 感染之前 图 6. 感染 24 小时后
逍鹏生物提供的解决方案:选用辐照血清以杀灭病毒。
6. 细胞交叉污染-玉石难分
细胞交叉污染之所以“玉石难分”是因为其长相和实验所养的目的细胞形态相似,难以分辨。对于细胞株的交叉污染,曾有文献报道统计,目前使用的细胞株大约有 15~20% 不是科学家们所认为的细胞,而在生物医药领域中,细胞来源和细胞株身份鉴定检测的观念是普遍缺乏的。
细胞株的交叉污染,常因不经意的实验疏忽(不同细胞株分盘时,共享一瓶培养基;枪头、移液管忘记更换,而造成不同细胞株之间的混合污染;实验操作人员录入错误细胞株名称;传代时的培养皿;冷冻细胞时的冻存管)而发生,继而造成后续数据搜集错误。
目前大部分的科学期刊都已有“细胞相关实验论文发表前,均需附上细胞鉴定报告”的规定(可查阅:文章发表前要求提供细胞鉴定的杂志),以此保证数据来源的正确性。
那么如何鉴别呢?细胞身份验证方式:短串联重复序列(STR)、同功酶分析、染色体组分型、扩增片段长度多态性(AFLP)的特征分析等方法。其中 STR,是目前国际细胞库(包括:ATCC、DSMZ 或是 JCRB)常用于细胞株身份鉴定方法。
Dr.Cell 可提供:
1. 人源细胞系 STR 鉴定(STR Authentication)
2. 细胞物种鉴定(Species Identification)-15 种常见模式动物的鉴定
☆ 温馨提示,至少每半年一次进行细胞鉴定,理想情况每 2-3 个月鉴定一次,且课题开展前最好先确认使用的细胞身份。本期介绍就到这里啦
各位老师可以根据我们的方法进行分析
如果您还是未找出问题所在
不要着急丢弃您的细胞们
欢迎关注逍鹏生物
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注:本文中部分图源和视频来自百度搜索引擎和客户提供。
BI 中国市场部:上海逍鹏生物科技有限公司
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