您是否总是遇到细胞抱团的现象？

您是否总是因为搞不清楚细胞抱团原因而困惑？

您是否总是因为难以将抱团细胞拯救回来而抓狂？

伙伴们，我来拯救你们的细胞了，今天我给大家从四个层面剖析细胞抱团的真实原因，快来围观吧！

  

Ⅰ

# 细胞本身生长特性有抱团倾向 #

 

有些细胞本身有抱团生长的特性，给大家看5种喜欢抱团的细胞类型：
 

细胞类型①：NCI-H716 人结直肠腺癌细胞

形态：淋巴母细胞样

生长特性：悬浮生长

图源网络，仅供参考学习使用

细胞喜欢在悬浮液中呈葡萄状聚集，抱团细胞粒粒饱满

 

细胞类型②：Caco-2人结直肠腺癌细胞

形态：上皮样

生长特性：贴壁生长

图源网络，仅供参考学习使用

此细胞喜欢贴壁成片分布，呈融合状，细胞个头大小不匀

 

细胞类型③：CaLu-3 人肺癌细胞

形态：上皮样

生长特性：贴壁生长

图源网络，仅供参考学习使用

此细胞也是喜欢聚集分布，呈片状，片状之间有空白

 

 

细胞类型④：SH-SY5Y人神经母细胞瘤细胞

形态：上皮样

生长特性：贴壁和悬浮生长

图源网络，仅供参考学习使用

此细胞贴壁居多，有轻微的抱团倾向

 

细胞类型⑤：BT-474人乳腺癌细胞

形态：上皮样

生长特性：贴壁、片状生长

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此细胞也是喜欢片状生长

 

 

看了这么多喜欢抱团的细胞类型，也会有喜欢分散生长的细胞类型吧，来给大家展示2种细胞类型：
 

细胞类型①：MSC（人源脂肪来源）

形态：成纤维样

生长特性：贴壁生长

图源客户，仅供参考学习使用

此细胞成纤维样，均匀分布，平铺皿底，不留空隙

 

 

细胞类型②：HEF小儿包皮成纤维细胞（人源脂肪来源）

形态：成纤维样

生长特性：贴壁生长

图源客户，仅供参考学习使用

此细胞也是喜欢分散生长，均匀分布

 

 

看了这些细胞形态，不知您是否和我有一个共鸣：大多数上皮样或神经母细胞瘤样的细胞更喜欢抱团生长，而大多数成纤维样细胞更喜欢分散、均匀生长。

 

又有一个问题来了，那就是我们如何区分细胞抱团正不正常。

这里开始划重点了，大家看好了：

    1.  如果细胞本身是分散生长，结果抱团严重，说明细胞“生病”了，我们要给细胞“诊治”。

    2.  如果本身生长特性就有抱团的细胞，如何判断它的抱团正不正常呢？

 

独门秘诀告诉您，细胞哪怕是抱团了，也是“粒粒饱满，棱角分明”的，回头看看上面抱团的细胞，是不是细胞之间有明确的“分界线”，这说明它们抱在一起很健康，很Happy；而异常的细胞抱团，你是观察不到细胞之间的“界限”的，细胞形态也不规则，边缘模糊，远远看去，抱团的细胞像“一团浆糊”。

 

 

Ⅱ

# 细胞老化更容易抱团 #

细胞类型：MSC(人源脐带来源第6代）

形态：成纤维样

生长特性：贴壁生长

图源网络，仅供参考学习使用
 

如图所示：

人脐带来源第6代的间充质干细胞，白色箭头指示的是发生细胞老化的MSC细胞，β-半乳糖苷酶染色阳性，染上蓝色。

由图片可以看出老化细胞体积增大、细胞扁平。白圈圈起来的是聚团细胞，老化细胞容易聚团生长，状态变差。

 

 

Ⅲ

# 血清批间差可能导致细胞抱团 #

那么问题来了，血清为何有批间差？

因为血清来源于动物，其组成成分有1000种左右，且血清组成及含量常随供血动物的年龄、生理条件和营养条件而异。每个批号的组分百分比含量都是不固定的，所以批间差异是存在的。

H9c2 低密度正常形态

旧批次血清

H9c2 低密度抱团形态

新批次血清

旧批次血清

H9c2高密度异常形态

新批次血清

图源客户，仅供参考学习用

 

血清批间差可能会导致细胞抱团。

如图所示，大鼠心肌细胞在更换了新批次的血清之后，随着传代次数的增加，抱团明显。正常低密度下，细胞舒展开来，均匀分散，但异常的的细胞会呈现聚集生长状态，高密度下正常细胞像铺路石一样均匀铺满，不留空隙，但高密度下异常的细胞，形态模糊，难以辨认，像四川九寨沟一样的沟壑重生。

 

Ⅳ

# 胰酶消化不当容易导致细胞抱团 #

HEK293细胞

 

导致细胞抱团的第一种情况是胰酶消化操作不当。

如果您经常遇到传代的细胞贴壁后老是贴壁不匀，成片分布，抱团生长，来看看你有没有注意这几个细节噢。

1.  如图所示，HEK 293因消化过度或吹打过猛导致细胞受伤严重，破损的细胞碎片容易粘连抱团；
2.  消化时细胞融合率太高，成片脱落，将不容易被吹散，容易抱团，我们建议细胞融合率达到80%传代为佳；
3.  吹打力度不足，难以将成片脱落的细胞吹散，容易抱团。  

导致细胞抱团的第二种情况是细胞对胰酶消化强度和纯度的敏感性。

1.  细胞对胰酶消化强度的敏感性。绝大多数细胞都可以适应普通胰酶（货号：03-050-1B：0.25%胰蛋白酶,0.02%EDTA）。这里的EDTA能螯合掉培养液中的Ca²⁺、Mg²⁺，加快细胞与皿底以及细胞之间的分离速度。但有极少部分细胞对胰酶消化强度很敏感，需要不含EDTA的胰蛋白酶（货号：03-046-1B：0.025%胰蛋白酶,不含EDTA），例如：大鼠肺泡二型上皮细胞。
2.  细胞对胰酶纯度的敏感性。胰蛋白酶主要是从猪的胰脏提取，纯化获得的结晶，再制成的冻干制剂。正是因为其是提取物，故纯度无法媲美重组胰酶，含有的杂酶比如羧肽酶对细胞有伤害，敏感的细胞类型如神经元类：小鼠海马神经元HT22；干细胞类：胚干，诱导干；间充质干需要用重组胰酶（货号：03-079-1B）消化。   

我们可以看一个例子：

用重组胰酶和普通含EDTA的0.25%胰酶消化间充质干细胞，重组胰酶消化的细胞生长分布均匀，状态良好，形态饱满，边缘清晰；而普通胰酶消化的细胞则明显抱团，状态很差，形态扁平，边缘迷糊，并形成大小不一的孔状。所以如果您养的细胞出现抱团，不妨尝试一下重组胰酶哦。

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本期讲解就到这里了，关于细胞抱团，是不是戳中了您养的细胞抱团的一种可能？

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