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小课堂FAQ| 细胞培养基础问答

人阅读 发布时间:2019-12-23 12:01

您有一封感恩节的信,请注意查收
HAPPY THANKSGIVING DAY

 


……结束了?

当然没有

正餐之后还有甜点~

知识永远都不会迟到

为感谢大家的支持

BI 专门为大家总结了系列问题的解决方案

下面跟小编一起进入细胞培养知识小课堂吧~

第一课

欢迎大家来到---细胞培养知识小课堂

细胞培养实验中用量最多的就是细胞培养基,虽然细胞培养试验基本技术大同小异,但是每种细胞的培养条件却相差甚远。若偏离某种细胞所需的培养条件,则会导致细胞表达不同的表型

因此,在实验前,需要熟悉自己所使用的细胞系,并在实验中严格遵守所有产品的操作说明。 

在实验过程中,作为实验小白,我们应该如何应对相关问题呢?

来,大家看黑板啦~  
 

 首先,我们要如何挑选适合自己细胞生长的培养基呢?

选择培养基没有确切的标准,有几点建议可供参考:

  1. 建立某种细胞株所用的培养基应该是培养这种细胞适合的培养基。可以查阅 ATCC 或在购买细胞株时咨询供应商。

  2. 根据细胞株的特点、实验的需要来选择培养基。如小鼠细胞株多选 RPMI1640。

  3. 其他实验室惯用的培养基不妨一试,许多培养基可以适合多种细胞。

  4. 也可用多种培养基培养细胞,观察其生长状态,可以用生长曲线、集落形成率等指标判断,根据实验室结果选择最佳培养基,这是最客观的方法,但比较繁琐。


如何正确地保存培养基?

普通的培养基放置在 2-8℃ 冰箱避光保存,若已开封建议3周内使用。未开封的培养基,一般可稳定保存1年。


培养基中酚红的作用是什么?导致培养基颜色变化的原因有哪些?

  1. 酚红在培养基中被用来作为 pH 值的指示剂:中性时为红色,酸性时为黄色,碱性时为紫色。

  2. 培养基颜色变黄,原因有:培养基中细胞代谢产物为酸性,培养瓶受污染,细菌代谢产酸等导致。

  3. 培养基颜色偏暗红色,原因有:培养基保存在 4℃ 冰箱中,培养基内的二氧化碳逐渐溢出,造成培养基越来越偏碱性,而培养基中的酸碱指示剂酚红会随着碱性增加而更偏暗红。


我感觉自己的培养基污染了,这要怎么进行测试呢?

取 0.1ml 液体培养基涂布到无菌蛋白栋牛肉膏培养基上 37℃ 培养 24h,观察有无杂菌生长(肉眼即可观察到)。


如果我的培养基中添加了血清和抗生素后,可长期保存吗?

一旦培养基中添加了血清和抗生素,建议避光保存在 4℃ 冰箱且在 2 周内用完。因为一些抗生素和血清的基本成分在解冻后就开始降解了。


哇!我的培养基怎么有沉淀了,这是怎么回事?怎么预防处理沉淀?

  1. 先判断培养基是否已经污染,其次,若沉淀为絮状沉淀则可能是加入血清引起的,此沉淀对细胞培养无影响。若沉淀为结晶,有可能是因为向培养基里加入的辅助试剂降低了培养基的溶解度,使一些无机盐析出。

  2. 可应用离心、过滤的方法去除这些沉淀,尽可能地减少血清冻融次数。


那我什么情况下可以使用不加酚红的培养基呢?

研究表明,酚红可以模拟固醇类激素(特别是雌激素)的作用。为避免固醇类反应,培养细胞时,用不加酚红的培养基;一些研究人员在做流式细胞检测时,为了避免酚红干扰检测,也使用不加酚红的培养基。

 


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