在培养细胞时，我们通常是没有一个完美的参照物去对比每种细胞形态是否正常，只能根据细胞的三种基本形态去辅助判断。但由于培养细胞环境各不相同，很多老师同学也无法判断出自己的细胞形态是否正常，也会影响接下来的实验。

今天我们小编将与大家一起对这个问题进行探讨~

细胞的基本形态

大多数培养的哺乳动物细胞根据其形态可以分为三大类：

△成纤维细胞（成纤维细胞样）
细胞是双极或多极的，狭长型，贴壁细胞。

△上皮细胞
呈多角形，尺寸更为规则，贴附在基质上呈散斑片状生长。

△淋巴细胞
呈球形，通常悬浮生长，不贴附在基质表面。

 

 

△HEF 胎儿包皮成纤维细胞

△huh7 人肝癌细胞

 

 

△病前

△病后

小鼠单核巨噬细胞白血病细胞（永生）Raw264.7

 

这个时候大家肯定很想知道是什么原因导致的，一般形态异常首先考虑的就是污染原因。

污染又大致分为以下几点：细菌污染、真菌污染、支原体污染、黑胶虫污染。那么这几种污染是如何区分的呢？

一、细菌污染

特征：

• * 在显微镜下或成黑色细沙状，或背景有大量黑点
• * 可能造成细胞增殖缓慢或形态上的改变（多角、多核等），细胞质中产生空泡、细胞不附着

如果确认是细菌污染，细胞娇贵不舍得丢掉的不要担心，我们已经为您准备好了相应对策。

 

细菌的克星-抗生素

货号	抗生素	作用对象	使用比例	储存条件
03-049-1B	卡那霉素溶液（10mg/ml）	细菌（如G+、G-、支原体）	稀释:1:100	-20ºC
03-035-1B	硫酸庆大霉素溶液（50 mg/ml）	细菌（如G+、G-、支原体）	稀释: 1:1000	AMB室温
03-031-1B	青链双抗	细菌（如G+、G-）	稀释: 1:100	-20ºC
03-031-5B	青链双抗，10浓缩液	细菌（如G+、G-）	稀释: 1:1000	-20ºC
03-032-1B	青链霉素，制霉菌素三抗	细菌（如G+、G-）、真菌（如：酵母菌、霉菌）	稀释: 1:100	-20ºC
03-033-1B	青链霉素，两性霉素B三抗	细菌（如G+、G-）、真菌（如：酵母菌、霉菌）	稀释: 1:100	-20ºC
03-034-1B	青链霉素，新霉素三抗	细菌（如G+、G-）	稀释: 1:100	-20ºC

 

二、真菌污染

真菌污染时会有类似棉花絮状的漂浮物，念珠菌会呈卵圆状，在细胞周边生长。

 

早期并不会使得培养基变黄变浑浊，但是在显微镜下可观察到菌丝体。真菌形成的菌丝呈丝状，管状，树枝状，串珠状。

  

真菌污染至少要三天后才能长出异常瑰丽的花纹图案。

 

酵母菌等，当其行出芽生殖时可通过一大一小的连体结构识别。

真菌污染整体特征是：

• * 细胞被污染后，仍可生长，长时间细胞的活力状态会变差
• * 梅雨季节时的污染率会提高
• * 呈卵圆状，在细胞周边生长，成团生长为真菌群

希望您的细胞不要也这样“好看”，不然只能留作欣赏用途了，或者可以尝试使用如下方法救治。

货号	抗生素	作用对象	使用比例	储存条件
03-029-1B	两性霉素B（2500 ug/ml）	真菌（如：酵母菌、霉菌）	稀释:1:1000 ~ 1: 10,000	-20ºC
03-030-1C	制霉菌素（10,000 units/ml）	真菌（如：酵母菌、霉菌）	稀释:1:100 to 1:1000	-20ºC
03-032-1B	青链霉素，制霉菌素三抗	细菌（如G+、G-）、真菌（如：酵母菌、霉菌）	稀释: 1:100	-20ºC
03-033-1B	青链霉素，两性霉素B三抗	细菌（如G+、G-）、真菌（如：酵母菌、霉菌）	稀释: 1:100	-20ºC

 

三、支原体污染

支原体广泛存在于人和动物体内，消毒不完全的器具也易带入支原体。污染时细胞培养基可能依然澄清或者呈微黄色，抽提核酸与蛋白时可有高达 30~50% 为支原体来源，造成结果偏差。那么支原体污染都有哪些明显特征呢？

• * 革兰氏染色为阴性，0.15-0.3 μm，光学显微镜难以辨识
• * 明显影响到细胞形态、增殖、基因表达与蛋白合成及代谢反应

也可使用支原体检测试剂盒进行检测：

该试剂盒可检测的 14 种支原体是：M.fermentans（发酵支原体）, M.hyorhinis（猪鼻支原体）, M.arginini（精氨酸支原体）, M.Orale（口腔支原体）, M.Salivarium（唾液支原体）, M.hominis（人型支原体）, M.pulmonis（肺支原体）, M.arthritidis（关节炎支原体）, M.bovis（牛支原体）, M.pneumoniae（肺炎支原体）, M.pirum（梨支原体）and M.capricolum（山羊支原体）, as well as Acholeplasma（无胆甾原体）and Spiroplasmaspecies（螺原体）。

△电泳图谱电泳结果（图片来源：终端用户仅供参考）

支原体检测试剂盒的特异性:

EZ-PCR 支原体检测试剂盒（货号：20-700-20）。

引物与美国国家生物技术中心（NCBI）数据库进行比对，并检测 16SrRNA 靶区同源性。96 种支原体具有相关序列同源性。

支原体杀除试剂
 BIOMYC 系列

BIOMYC-1 货号：03-036-1B 主要成分：太妙菌素

BIOMYC-2 货号：03-037-1B 主要成分：Minocycline

BIOMYC-3 货号：03-038-1B 主要成分：环丙沙星

方案一

BIOMYC-1（03-036）和 BIOMYC-2（03-037）的使用方法：

• * 加 1ml 的 BIOMYC-1 溶液至 100 ml 培养基中，保持受污染的细胞在混合液中培养 4 天。期间需加入含 BIOMYC-1 溶液的少许的新培养基；
• * 4 天后，加 1ml BIOMYC-2 溶液至 100 ml 的新培养基中，并维持培养 3 天；
• * 以上是一个处理循环阶段，必要时可继续 2－3 次如上处理循环；
• * 在处理过程中，细胞需要做支原体污染检测，以确认效果，从而适当减少实验过程。

方案二

BIOMYC-3（03-038）的使用方法：

• * 加 1ml BIOMYC-3 至 100 ml 培养基中；
• * 持续培养 14 天，期间每 2-3 天更换一次培养基；
• * 14 天后，用不含 BIOMYC-3 的完全培养基继续培养细胞 14 天后再做支原体检测。

经济考虑，用户选择一种方案即可；最佳方案是，客户先用方案一处理一周期，再用方案二处理一周期。

友情提示：如果使用其中一种方案，不能根除支原体，说明该支原体可能在另一种方案的抑菌谱内；36，37，38 三者联合可有效根除实验室80%以上的支原体污染。

四、黑胶虫污染

在细胞复苏或传代时往往会出现黑胶虫污染，并且与细胞呈现此消彼长的现象，但是培养基却并不浑浊。黑胶虫具有细胞毒性，可引起细胞生长迟缓或裂解凋亡。
黑胶虫较明显的污染特征：

• * 活跃游动
• * 呈卵圆状，球状，杆状等

目前科学界对黑胶虫的身份并无定论，Dr.Cell 目前检测的黑胶虫样本，62% 为细菌，38% 为支原体。（→详情点击此处查看“黑胶虫通缉令”）

黑胶虫杀除试剂 BIOMYC 系列

BIOMYC-1 货号：03-036-1B 主要成分：太妙菌素

BIOMYC-2 货号：03-037-1B 主要成分：Minocycline

BIOMYC-3 货号：03-038-1B 主要成分：环丙沙星

 抗生素  三抗 货号：03-033-1B 主要成分：青、链、两性霉素。 

黑胶虫杀除方案一

BIOMYC-1（03-036）和 BIOMYC-2（03-037）和三抗（03-033）的使用方法：

• * 加 1ml BIOMYC-1 和三抗溶液至 100 ml 培养基中，保持受污染的细胞在混合液中培养 4 天。期间需加入含 BIOMYC-1 和三抗溶液的少许的新培养基；
• * 4 天后，加 1ml BIOMYC-2 和三抗溶液至 100 ml 的新培养基中，并维持培养 3 天；
• * 以上是一个处理循环阶段，必要时可继续 2－3 次如上处理循环；
• * 在处理过程中，细胞需要做支原体污染检测，以确认效果，从而适当减少实验过程。

黑胶虫杀除方案二

BIOMYC-3（03-038）和三抗（03-033）的使用方法：

• * 加 1ml BIOMYC-3 和三抗溶液至 100 ml 培养基中；
• * 持续培养 14 天，期间每 2-3 天更换一次培养基；
• * 14 天后，用不含 BIOMYC-3 和三抗溶液的完全培养基继续培养细胞 14天 后再做支原体检测。

好啦，今天我们就分享到这里啦~下期我们会接着分享后续细胞形态异常分析的其他方面噢~

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