细胞为啥总是一言不合就抱团生长？！

是细胞污染了还是正常现象？

是消化不好了还是铺板有问题？

抱团细胞越来越多，怎么样才能让细胞分开生长？

请认真阅读以下干货，看看能否帮您答疑解惑！

细胞抱团一定代表细胞状态不好吗？

细胞生长的时候肯定是要相互联系，大部分的细胞都是要成片生长的，应该仔细观察每种细胞的状态，抱团并不一定代表不好：

• 1. 若细胞轮廓清晰，可看清楚一个个的细胞，像葡萄一样，一串串的，就是状态好的，说明细胞在分裂。

• 2. 但大部分细胞抱团绝对不是一件好事！如果轮廓消失，出现细胞融解或细胞变灰暗、透光性变差，就是细胞死亡了。葡萄状和抱团，在镜下其实很容易区别。抱团死亡的细胞可以看到细胞碎片，如下图：

 

RAW264.7细胞-正常状态                                                    RAW264.7细胞-异常状态

      

H9c2细胞-正常状态                                               H9c2细胞-异常状态

 

• 3. 细胞抱团是因为细胞污染了吗？一般细胞培养液清亮，就不是污染。如果是污染了的话，可以通过观察培养液颜色，若污染，则很浑浊。

 

细胞为啥总是喜欢抱团？

• 1. 细胞死亡释放出DNA，缠绕其他细胞，形成黏性的细胞团（消化的过程可能过于粗暴，吹打太用力，消化太久，消化液太强或有毒性等）。

• 2. 细胞离心速度过大或时间太长。

• 3. 消化不完全的时候，细胞和细胞之间的连接没有分开；消化过度的时候，圆形的细胞容易聚堆，再分开很困难！

• 4. 状态不好、老化的细胞，也可能会出现抱团生长的情况（比如换液不及时、长的太满才传代、污染等造成的细胞状态差）。

• 5. 传代时没有吹打均匀，细胞团多，培养时就会是一团一团的。

• 6. 传代后细胞铺板不均匀。

• 7. 有可能是杂细胞，或者死细胞。

• 8. 细胞未消化开。

• 9. 非震荡培养或细胞量过多的话就会成团。

 

如何避免细胞抱团？

• 1. 用无钙镁平衡盐溶液洗涤细胞。（VivaCell：C3580-0500）

• 2. 对于贴壁非常牢固的细胞（如MDCK），为了细胞更好的状态，更漂亮的样子，建议分多批多次消化，这样才能最大限度地降低胰酶对细胞的损伤，保证细胞的状态能够最优。

• 3. 细胞生长密度不要太高，70%－80％就好（细胞刚刚基本成单层细胞，没有出现堆叠生长），这样细胞抱团的几率就大大减少了。如果细胞已经长成集落，可先将细胞低密度传代，第二天再消化传代，这样连续传三次，细胞抱团就会越来越小，这样几代过后，再按照常规消化方法和时间能将细胞逐渐传成单个的。

• 4. 消化过程中最好不要使劲摇动培养瓶，这样细胞特别容易成屑样脱落。细胞一旦脱落入悬液里就很难再将他吹打成单个（因为细胞没有受力点了，所以细胞很难分散开）。所以必须要在细胞未脱落之前将其吹打开，严格控制好消化程度。

• 5. 消化过程需要使用枪头轻轻吹打，切忌使劲拍培养瓶的侧壁。拍瓶子想要将细胞拍散的力度对于细胞来说相当于大地震，细胞本身是无法承受如此振荡的。

 

细胞抱团了，要如何处理？

• 1. 如果细胞抱团不影响生长就没问题，只是计数的时候要麻烦点了。

• 2. 如果感觉有死细胞的DNA，在细胞悬液中加入几滴无菌的DNAse(1mg/ml溶于水)将DNA链打断。轻柔地吹打细胞，防止对细胞膜造成物理损伤。

• 3. 如果细胞抱团是肉眼可见的，那就让细胞静置半分钟左右，然后吸取上半部分没有抱团的细胞悬液来传代。如果细胞抱团肉眼不可见，那可能没有特别好的分离方法，只能等细胞状态改善后将这部分细胞慢慢排除出去。

☆ 如若需要细胞进行抱团，那么该如何处理呢？

以MSC诱导成软骨方向分化为例：可使用96孔板，每个孔板接种30万个细胞。

注：细胞类型不同，要求也各不相同，大家可根据自身情况留言咨询哦~

 

引起细胞抱团的根本原因是细胞状态变差，且在吹打细胞的时候，那些状态好的细胞也会因为多次吹打而受损，所以我们认为最根本的解决方法是摸透培养的细胞的生长习性，让细胞保持较好的生长状态。

 

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