由于血清来源于动物，且含有细胞培养中所需的各种营养（血浆蛋白、多肽、脂肪、碳水化合物、生长因子、激素、无机物等），这奠定了血清是细胞培养实验中最普遍的试剂的基础。

 

目前血清采集地主要分布在以下国家：

 

市面上的牛血清产品名称虽然五花八门，但根据其不同的特性，追其根本，大致可分为以下四种。根据牛的取血年龄可以区分：

 

胎牛血清

胎牛血清（Foetal Bovine Serum，简称FBS）指的是取自未出生，母牛剖腹心脏穿刺采血得来的血清。

国产胎牛血清

国产胎牛血清（并无明确定义，但通常用此命名）指的是出生4-6小时，且未进行哺乳（unsuckled）进食的新生牛，有时还称作国产新生牛血清。

新生牛血清

新生牛血清（Newborn Calf Serum，简称NBCS，或称小牛血清）指的是出生14天-3个月进行取血的牛血清。

成年牛血清

成年牛血清（Adult Bovine Serum，简称ABS）指的是取血时牛龄通常超过12个月的牛血清。

 

以上取血牛龄的差异主要是受当地国家畜牧业的发展及法规限制影响，因为牛血多为畜牧业副产业，并未有专门为取血而养的牛。

 

 

几种血清的比较：

 

 

项目	等级
提取血清体积/只牛	成年牛血清(5-8L) > 小牛血清 (2L) > 国产胎牛血清 (1L) > 胎牛血清 (0.5L)
培养细胞的效果	胎牛血清 > 国产胎牛血清 > 小牛血清 > 成年牛血清
价格	胎牛血清 > 国产胎牛血清 > 小牛血清 > 成年牛血清

 

这几种不同牛龄血清所含的促细胞生长因子、促贴附因子、激素及其他活性物质等组分与比例不同。常规来说，年龄越小的牛血清，细胞培养效果越好。胎牛血清培养效果好于新生牛，且因为胎牛未进食过母乳，所以IgG含量低。故目前多数实验人员选择的都是胎牛血清进行细胞培养。

 

 

胎牛血清成分已知的已有上千多种，以下为主要成分表：

 

 

成分	浓度	成分	浓度
蛋白和多肽	-	磷脂	0.7-3.0 mg/ml
白蛋白	20-50mg/ml	丙酮酸	2-10 ug/ml
胎球蛋白	10-20mg/ml	碳水化合物	-
纤连蛋白	1-10 ug/ml	葡萄糖	0.6-1.2 mg/ml
球蛋白	1-15 mg/ml	乳酸	0.5-2.0 mg/ml
α-抗胰蛋白酶	0.5-2.5 mg/ml	多胺	-
转铁蛋白	2-4 mg/ml	丁二胺,亚精胺	0.1-1.0 uM
生长因子	-	尿素	170-300 ug/ml
EGF, PDGF, IGF-I, IL-1	1-100 ng/ml	无机物	-
氨基酸	0.01-1.0 uM	钙，氯化物，钾，磷	-
脂质	-	激素	-
胆固醇	10 uM	胰岛素	1-100 ng/ml
脂肪酸	0.1-1.0 uM	皮质醇	10-200 nM
亚油酸	0.01-0.1 uM	维生素	10 ng-10 ug/ml

 

 

以下是我们为您总结的血清相关的知识点：

 

1. 血清的颜色如何？

为何有的胎牛血清颜色偏红，而有的偏黄？是因为胎牛血清颜色是由血红蛋白（鲜红）和胆红素（黄）决定的，主要是受血红蛋白影响。血红蛋白含量很低时，含少量胆红素，呈淡黄或金黄。血红蛋白含量高时，会呈现淡红色。

需要长期保存的血清必须储存于-20℃冰箱（未开封血清有效期为5年）。若存放于4℃，请勿超过1个月，若一次无法用完一瓶，建议将血清无菌分装并冷冻。

 

2. 血清如何解冻？

血清解冻需采用逐步解冻法：将血清从-20℃冰箱放入4℃冰箱中溶解一天，然后移入室温，待全部溶解后再分装。在溶解过程中需不断轻轻摇晃均匀（小心勿造成气泡），减少沉淀生成。切勿直接将血清从-20℃转入37℃解冻，这样因温差较大易造成蛋白质凝结并出现沉淀。

 

3. 使用前是否需要过滤？

本公司血清在ISO 13485认证的厂房中生产，经过3次0.1 μm过滤，出厂经过检测并且会使用三种以上的细胞株进行培养测试及无菌检测，污染几率非常非常非常低（重要的事情说三遍）。通常细胞污染有非常多的可能性，根据协助使用者进行分析检测，结果表明绝大部分都是因人为操作失误导致污染。因此买来的血清不需要再次进行过滤。

下图为人肉眼和光学显微镜所能观察到的微粒大小。由于我们的血清是经过3次0.1 μm过滤，因此若肉眼可以观察到异物时，可以考虑：

• 是否血清溶解后蛋白质凝集
• 是否操作时导入污染物

 

4. 为什么血清中会有沉淀生成，主要成分是什么，会对实验有什么影响？

血清中沉淀主要有：纤维蛋白（絮状沉淀），胎球蛋白，脂蛋白，冷凝集素，玻连蛋白，磷酸钙（显微镜下小黑点沉淀），胆固醇等。

原因：造成沉淀的主要原因是温度的改变。热灭活，反复冻融，长期储存于2-8℃或者室温。

预防：非必要，不用热灭活；避免反复冻融；-20℃保存；4℃全融（期间间断摇晃均匀）；2000 rpm离心5分钟(不建议用0.2 μm滤膜过滤），取上清使用。

根据多年的实验研究显示，血清中的沉淀物不会影响细胞培养。ATCC（美国菌种保藏中心）实验也是相同的结果。

美国ATCC：https://www.atcc.org/

 

5. 黑胶虫是来源于血清吗？

目前科学界对黑胶虫的身份并无定论, 通常是显微镜下观察到密密麻麻的小黑点在培养基中自主游动，就称为黑胶虫污染。

本公司技术服务部 “Dr.Cell” 目前检测的数十个所谓“黑胶虫”样本，其中62%为细菌（如Sphingomonas paucimobilis，Blastomonas natatoria strain），38%为支原体（如：Mycoplasma hyorhinis，Mycoplasma pulmonis strain）。

黑胶虫在镜下的典型特征呈卵圆状、球状、杆状等，可引起细胞生长迟缓或裂解凋亡。

目前没有充分的数据表明黑胶虫来源于血清，因为其尺寸远大于血清过滤时所用的0.1微米(μm)滤膜。建议各位老师通过使用三抗（Cat#: C3422-0100）外加支原体处理试剂（Cat#: 03-038-1B）尝试杀灭黑胶虫。

 

6. 血清存在批间差吗？

答案是毋庸置疑的，因为血清来源于动物，其组成成分有1000种左右，且血清组成及含量常随供血动物的性别、年龄、生理条件和营养条件不同而异。每个批号的组分和百分比含量都是不固定的，所以批间差异是存在的。

建议先进行批号测试，筛选出合适批号，购买半年甚至一年以上的用量，避免批间差造成实验波动（胎牛血清在-20℃保存可达5年）。

 

Tips：

如果要除去血清中的沉淀，可以将血清分装至无菌离心管中，400g 离心，留上清即可。由于滤膜容易被沉淀堵塞，因此不建议用过滤的方法。

沉淀不是检验血清的硬指标，但为了实验准确、实验美观、实验便利，还是应该尽量减少沉淀的产生。掌握正确的血清解冻、使用方法，再加上一款品质稳定的优秀血清，对于细胞实验来说，至关重要。

正确的使用方法与优质的血清，二者缺一不可。

 

Reference

【1】Didier Raoult, Patricia Renesto et al. PLoS Pathogens. 2008 Feb., 4(2): e41

 

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