夏天到了，天气炎热，空气中的温度湿度都在上升，

这时最易滋生细菌等微生物，导致细胞培养过程会没有那么的顺利，总是被污染，

而且微生物繁殖的速度非常快。今天我们就来说道说道细胞污染应该怎么预防、处理。

 

 

目前细胞污染大致可分为：细菌、真菌、支原体、黑胶虫、病毒等污染。那么想要解决问题，我们就需要知道细胞是遭受了何种污染，才可对症下药。接下来我们将带领大家逐步分析这些污染。

 

 

#1

细胞污染

细 菌

细菌污染时，培养基在短时间内变成黄色或白色浑浊，有时稍加震荡，便会有很多混浊物漂起。有些状况下培养基颜色改变不明显但细胞形态会变异（出现多角，多核状况）、细胞不附着。

 

细菌属于原核生物，比细胞小很多，在显微镜下或成黑色细沙状，或背景有大量黑点。可能造成细胞增殖缓慢或形态上的改变（多角、多核等），细胞质中产生空泡、细胞不附着。

 

 

如遇细菌污染，我们可以如何处理呢？

合理使用相应抗生素可杀灭细菌：

 

货号	抗生素	作用对象	使用比例	储存条件
03-049-1B	卡那霉素溶液	细菌（如G+、G-）、支原体	稀释:1:100	-20ºC
03-035-1B	硫酸庆大霉素溶液	细菌（如G+、G-）、支原体	稀释: 1:1000	AMB室温(15-30℃)
03-031-1B	青链双抗	细菌（如G+、G-）	稀释: 1:100	-20ºC
03-031-5B	青链双抗，10浓缩液	细菌（如G+、G-）	稀释: 1:1000	-20ºC
03-032-1B	青链霉素，制霉菌素三抗	细菌（如G+、G-）、真菌（如：酵母菌、霉菌）	稀释: 1:100	-20ºC
03-033-1B	青链霉素，两性霉素B三抗	细菌（如G+、G-）、真菌（如：酵母菌、霉菌）	稀释: 1:100	-20ºC
03-034-1B	青链霉素，新霉素三抗	细菌（如G+、G-）	稀释: 1:100	-20ºC

 

 

#2

细胞污染

真 菌

真菌指的是类似棉絮状的漂浮物，真菌是真核生物，比细胞大。在显微镜下可观察到菌丝体，真菌有菌丝体，呈丝状、管状、树状、串珠状。真菌一般呈菌落聚集生长。污染早期不会使培养基变黄。

 

细胞被真菌污染后，仍可生长，长时间细胞的活力状态会变差，梅雨季时的污染率会提高。

 

真菌的种类也比较多：酵母菌、念珠菌、霉菌（青霉菌、根霉菌、曲霉）、蕈菌等。这些菌类都有各自的特点，很容易区分。

 

酵母菌：成串的卵状物，体积为细胞的1/5~1/10倍，可由出芽生殖时的一大一小连体结构识别，污染严重时会造成培养基pH值改变，不易去除。

 

念珠菌：卵圆状，在细胞周边生长。

 

霉菌：霉菌在我们的生活中无处不在，它比较青睐于温暖潮湿的环境，一有合适的环境就会大量的繁殖，有绿色，毛茸茸的青霉菌，还有像树根一样根霉菌。

 

如果发现真菌污染，我们如何进行处理呢？

合理使用相对应的抗生素，可有效杀灭真菌污染：

 

货号	抗生素	作用对象	使用比例	储存条件
03-029-1B	两性霉素B	真菌（如：酵母菌、霉菌）	稀释:1:1000 ~ 1: 10,000	-20ºC
03-030-1C	制霉菌素	真菌（如：酵母菌、霉菌）	稀释:1:100 ~ 1:1000	-20ºC
03-032-1B	青链霉素，制霉菌素三抗	细菌（如G+、G-）、真菌（如：酵母菌、霉菌）	稀释: 1:100	-20ºC
03-033-1B	青链霉素，两性霉素B三抗	细菌（如G+、G-）、真菌（如：酵母菌、霉菌）	稀释: 1:100	-20ºC

 

 

#3

细胞污染

支 原 体

支原体常来源于实验人员（支原体常见于人体皮肤、呼吸道、生殖道和消化道）、动物源血清及胰酶、消毒不完全的器具，体积只有0.15~0.3μm，所以能通过一般培养基0.2μm过滤膜进入培养基体系，培养基不会变黄，所以污染时不容易用常规方法发现，光学显微镜难以辨识。

 

 

支原体革兰染色为阴性，大部分支原体繁殖速度比细菌慢，对青霉素类的抗生素不敏感。污染不但会缓慢的改变细胞形态（拉丝、铺展）、增殖、基因表达、蛋白合成及代谢反应，它携带的DNA/RNA与蛋白更可能造成QPCR或Western Blot结果偏差。

 

BIOMYC-1

（03-036）

主要成分

太妙菌素
 

BIOMYC-2

（03-037）

主要成分

四环素
 

BIOMYC-3

（03-038）

主要成分

环丙沙星

 

方案一：BIOMYC-1（03-036）和BIOMYC-2（03-037）的使用方法：

1. 加1ml的 BIOMYC-1 溶液至100ml培养基中，保持受污染的细胞在混合液中培养4天，期间可用含 BIOMYC-1 的新培养基对细胞进行传代；

2. 4天后，加1ml BIOMYC-2 溶液至100ml的新培养基中，并维持培养3天，期间可进行传代。

3. 以上是一个处理周期，必要时可继续 2－3 次处理周期。

4. 每过一个周期，细胞需要做支原体污染检测，以确认效果，从而适当减少实验过程。

 

方案二：BIOMYC-3（03-038）的使用方法：

1. 加1ml BIOMYC-3至100ml培养基中；

2. 持续培养14天，期间可进行传代;

3. 以上是一个处理周期，必要时可继续 2－3 次处理周期。

4. 每过一个周期，细胞需要做支原体污染检测，以确认效果，从而适当减少实验过程。

 

提 示

支原体杀除试剂对实验几乎没有影响，可进行细胞实验；如果客户使用其中一种方案，不能根除支原体，说明该支原体可能在另一种方案的抑菌谱内；最佳方案是先用方案一处理一周期，再用方案二处理一周期，然后做支原体检测。

 

 

#4

细胞污染

黑 胶 虫

目前科学界对黑胶虫并无定论，认为是不明沉淀现象或多种未知生物污染现象的通称。

 

黑胶虫不是一个新的物种，是大家对显微镜下会活跃游动或原代打转、颤动的未经测序鉴定的微生物的别称。因为多呈黑点的游动，被大家称为“黑胶虫”。实际上，它不是虫子，经过我们对多个客户提供的黑胶虫样本测序，发现实际上它是各种细菌。大多数细菌都有鞭毛，这也就不难理解，它为啥会像虫子一样游动或原地打转，颤动。

 

 

在高倍率显微镜头下，可观察到各式形状的小黑点（卵圆状、球状、杆状等）、活跃的布朗运动及明显游动现象。

 

 

 

复苏或传代时往往会出现黑胶虫污染，并且与细胞呈现此消彼长的现象，部分黑胶虫具有细胞毒性，可引起细胞生长迟缓或裂解凋亡，培养基不浑浊。

 

Dr.Cell可提供：黑胶虫样本鉴定，Cat No.：T80600001

目前检测的黑胶虫样本，实际上62%为细菌，38%为支原体

 

解决方案：

三抗(03-033)

青、链、两性霉素

BIOMYC-1

（03-036）

主要成分

太妙菌素
 

BIOMYC-2

（03-037）

主要成分

四环素
 

BIOMYC-3

（03-038）

主要成分

环丙沙星

 

方案一：BIOMYC-1（03-036）和BIOMYC-2（03-037）和三抗（03-033）的使用方法：

1. 加1ml的 BIOMYC-1 和三抗溶液至 100ml培养基中，保持受污染的细胞在混合液中培养 4 天。期间需加入含 BIOMYC-1和三抗溶液的少许的新培养基；

2. 4天后，加1ml BIOMYC-2和三抗溶液至 100ml 的新培养基中，并维持培养 3 天；

3. 以上是一个处理周期，必要时可继续 2－3 次如上处理循环。 

 

方案二：BIOMYC-3（03-038）和三抗（03-033）的使用方法：

1. 加1ml BIOMYC-3和三抗溶液至100ml培养基中；

2. 持续培养14天，期间每2-3天更换一次培养基;

3. 以上是一个处理周期，必要时可继续 2－3 次如上处理循环。

4. 在处理过程中，细胞需要做支原体污染检测，以确认效果，从而适当减少实验过程。 

 

 

以上污染与实验室环境，温度湿度等都有较大的关系，因此细胞房我们也需要提前做好预防。

 

 

 细胞房环境防菌试剂 

 

Pharmacidal （IC-110100）

 

产品主要成分：

Pharmacidal 是由筛选过的有机氮化合物组成，主要组成成分为：N-Octyl-dimethyl-benzyl ammonium chloride，Benzethonium chloride，Methyl-benzethonium chloride，并添加丙二醇等清洁消毒剂。

 

作用原理：

Pharmacidal作用方式是使脂质变性，分解细胞膜的双层磷脂质和增加细胞通透性，导致酶的灭活，蛋白质沉淀，与DNA和RNA产生反应。

 

特点：

1. Pharmacidal 对大部分的细菌、芽孢、支原体、真菌（酵母菌、霉菌）和病毒都有效。

2. 不含汞、甲醛、酒精，可生物降解、无毒、无刺激，对一般的工作台面和器材没有腐蚀性和任何损伤。

 

使用方法：

1. 可消毒橡胶手套、超净台面、桌面、显微镜台等物体表面，喷涂完全湿润，不需擦拭，自然风干。

2. 培养箱内壁喷涂完全湿润后，等待10分钟后，用无菌吸水纸吸干内壁上的残留液体。

 

 

 

水浴锅、水盘防菌试剂 

 

Aquaguard-1

（01-867）

主要成分

苯甲酸钠

Aquaguard-2

 (01-916)

主要成分

2-溴代-2-硝基-1,3-丙二醇

 

Aquaguard-1

用来消毒培养箱中的水盘，可有效杀灭细菌、芽孢、支原体、真菌（酵母菌、霉菌）和病毒；无毒；对不锈钢无腐蚀性；不挥发。

用法：

1. 建议每两周进行一次系统地清洁和消毒培养箱。

2. 稀释100倍即可使用，即将1升水中加入10ml的Aquaguard-1溶液。

 

Aquaguard-2

用来消毒水浴锅，可有效杀灭细菌、芽孢、支原体、真菌（酵母菌、霉菌）和病毒。

用法：

1. 建议每周进行一次系统地清洁和消毒水浴锅。

2. 稀释500倍即可使用，即将1升水中加入2ml的Aquaguard-2溶液。

 

 

 

 

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