细胞污染大展观 - 支原体&黑胶虫篇

VivaCell

 

天气渐热

实验人最头疼的事情又来了

- 细胞污染 -

夏季是污染频发的时间

那么如何判断污染及预防污染呢？

今天我们一起来看看吧~

 

细胞污染可以分为四大类：细菌污染、真菌污染、支原体污染及黑胶虫污染。

 

03

支 原 体 污 染

 

支原体污染特征：

◆ 增殖减慢

◆ 上清液清澈

◆ 背景干净

◆ 细胞形态异常（拉丝、铺展）

◆ 更换新的培养液，细胞状态没有恢复

 

示例1►EBTr (牛胚气管细胞)

感染支原体的EBTr (牛胚气管细胞)（成纤维样）

 

感染了支原体的EBTr：由成纤维样逐渐变得类上皮样；质膜铺展，溃烂；轮廓不清，边界模糊；凋亡细胞过多。
 

示例2►HT1080 (人纤维肉瘤细胞)

被支原体“附身”的HT1080

 

甩掉支原体的HT1080

 

被支原体污染的人纤维肉瘤细胞：由上皮样逐渐变得类成纤维样，胞体细长；伪足伸长，出现明显的拉丝现象。

 

支原体检测去除如何一步到位？

支原体检测试剂：EZ-PCR法（主流方法）

该试剂盒可检测到的14种支原体是：

M.fermentans（发酵支原体）， M.hyorhinis（猪鼻支原体）， M.arginini（精氨酸支原体）， M. Orale（口腔支原体）， M.Salivarium（唾液支原体）， M.hominis（人型支原体）， M.pulmonis（鼠肺支原体）， M.arthritidis（关节炎支原体），M.bovis（牛支原体）， M.pneumoniae（肺炎支原体），M.pirum（梨支原体）， M.capricolum（山羊支原体）， Acholeplasma （无胆甾原体），Spiroplasma species（螺原体）。

 

支原体杀除试剂：

（03-036）

主要成分

太妙菌素

BIOMYC-2（03-037）

主要成分

二四环素

BIOMYC-3（03-038）

主要成分

环丙沙星

 

 

方案一：BIOMYC-1（03-036）和BIOMYC-2（03-037）的使用方法：

1. 加1ml的 BIOMYC-1 溶液至100ml培养基中，保持受污染的细胞在混合液中培养4天，期间可用含 BIOMYC-1 的新培养基对细胞进行传代；

2. 4天后，加1ml BIOMYC-2 溶液至100ml的新培养基中，并维持培养3天，期间可进行传代。

3. 以上是一个处理周期，必要时可继续 2－3 次处理周期。

4. 每过一个周期，细胞需要做支原体污染检测，以确认效果，从而适当减少实验过程。

 

方案二：BIOMYC-3（03-038）的使用方法：

1. 加1ml BIOMYC-3至100ml培养基中；

2. 持续培养14天，期间可进行传代;

3. 以上是一个处理周期，必要时可继续 2－3 次处理周期。

4. 每过一个周期，细胞需要做支原体污染检测，以确认效果，从而适当减少实验过程。

 

提示：支原体杀除试剂对实验几乎没有影响，可进行细胞实验；如果用户使用其中一种方案，不能根除支原体，说明该支原体可能在另一种方案的抑菌谱内；最佳方案是先用方案一处理一周期，再用方案二处理一周期，然后做支原体检测。

 

04

黑 胶 虫 污 染

黑胶虫污染特点：

◆ 培养基不浑浊

◆ 复苏或传代时往往会出现黑胶虫污染，并且与细胞呈现此消彼长的现象

 

黑胶虫解决方案：

青、链、两性霉素
 

BIOMYC-1

（03-036）

主要成分

太妙菌素
 

BIOMYC-2（03-037）

主要成分

二四环素
 

BIOMYC-3（03-038）

主要成分

环丙沙星

 

 

方案一：BIOMYC-1（03-036）和BIOMYC-2（03-037）和三抗（03-033）的使用方法：

1. 加1ml的 BIOMYC-1 和三抗溶液至 100ml培养基中，保持受污染的细胞在混合液中培养 4 天。期间需加入含 BIOMYC-1和三抗溶液的少许的新培养基；

2. 4天后，加1ml BIOMYC-2和三抗溶液至 100ml 的新培养基中，并维持培养 3 天；

3. 以上是一个处理周期，必要时可继续 2－3 次如上处理循环。 

 

方案二：BIOMYC-3（03-038）和三抗（03-033）的使用方法：

1. 加1ml BIOMYC-3和三抗溶液至100ml培养基中；

2. 持续培养14天，期间每2-3天更换一次培养基;

3. 以上是一个处理周期，必要时可继续 2－3 次如上处理循环。

4. 在处理过程中，细胞需要做支原体污染检测，以确认效果，从而适当减少实验过程。 

 

友情提示：用户选择一种方案即可；最佳方案是，用户先用方案一处理一周期，再用方案二处理一周期。如果用户使用其中一种方案，不能根除黑胶虫，说明该黑胶虫可能在另一种方案的抑菌谱内。

 

这么多污染如何进行预防呢？

 

水浴锅、水盘防菌试剂：

Aquaguard-1

（01-867）

主要成分

苯甲酸钠

 

Aquaguard-2

 (01-916)

主要成分

2-溴代-2-硝基-1,3-丙二醇
 

Aquaguard-1

用来消毒培养箱中的水盘，可有效杀灭细菌、芽孢、支原体、真菌（酵母菌、霉菌）和病毒；无毒；对不锈钢无腐蚀性；不挥发。

用法：

1. 建议每两周进行一次系统地清洁和消毒培养箱。

2. 稀释100倍即可使用，即将1升水中加入10ml的Aquaguard-1溶液。

 

Aquaguard-2

用来消毒水浴锅，可有效杀灭细菌、芽孢、支原体、真菌（酵母菌、霉菌）和病毒。

用法：

1. 建议每周进行一次系统地清洁和消毒水浴锅。

2. 稀释500倍即可使用，即将1升水中加入2ml的Aquaguard-2溶液。

 

细胞培养箱防菌试剂：Pharmacidal （IC-110100）

主要成分：Pharmacidal 是由筛选过的有机氮化合物组成，主要组成成分为：苄基二甲基辛基氯化铵、苄索氯铵、乙基铵、三羟乙基胺，并添加丙二醇等清洁消毒剂。

 

作用原理：Pharmacidal作用方式是使脂质变性，分解细胞膜的双层磷脂质和增加细胞通透性，导致酶的灭活，蛋白质沉淀，与DNA和RNA产生反应。

 

特点：

1. Pharmacidal 对大部分的细菌、芽孢、支原体、真菌（酵母菌、霉菌）和病毒都有效。

2. 不含汞、甲醛、酒精，可生物降解、无毒、无刺激，对一般的工作台面和器材没有腐蚀性和任何损伤。

 

使用方法：可消毒橡胶手套、超净台面、桌面、显微镜台、试剂瓶身等物体表面，喷涂完全湿润，不需擦拭，自然风干。

培养箱内壁喷涂完全湿润后，等待10分钟后，用无菌吸水纸吸干内壁上的残留液体。

 

 

 

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